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【佳學(xué)基因-基因檢測(cè)】目標(biāo)序列捕獲技術(shù)簡(jiǎn)介

【佳學(xué)基因-基因檢測(cè)】 目標(biāo)序列捕獲技術(shù)簡(jiǎn)介 目標(biāo)序列捕獲技術(shù)是通過(guò)定制目標(biāo)基因組區(qū)域的探針,與基因組DNA進(jìn)行雜交,將目標(biāo)區(qū)域DNA富集后進(jìn)行 高通量測(cè)序 的技術(shù)手段。 在進(jìn)行外顯子組測(cè)序時(shí),大約85%的致病突變發(fā)生在蛋白編碼區(qū),為了正確找到并富集所要檢測(cè)的外顯子序列,就要采用序列捕獲技術(shù),對(duì)研究已知基因的單核苷酸多態(tài)性和小片段插入/缺失突變檢測(cè)等具有

佳學(xué)基因-基因檢測(cè)目標(biāo)序列捕獲技術(shù)簡(jiǎn)介

 

 

目標(biāo)序列捕獲技術(shù)是通過(guò)定制目標(biāo)基因組區(qū)域的探針,與基因組DNA進(jìn)行雜交,將目標(biāo)區(qū)域DNA富集后進(jìn)行高通量測(cè)序的技術(shù)手段。
 

在進(jìn)行外顯子組測(cè)序時(shí),大約85%的致病突變發(fā)生在蛋白編碼區(qū),為了正確找到并富集所要檢測(cè)的外顯子序列,就要采用序列捕獲技術(shù),對(duì)研究已知基因的單核苷酸多態(tài)性和小片段插入/缺失突變檢測(cè)等具有較大的優(yōu)勢(shì)。
 


 

在人的染色體上有許多與外顯子有同源性的部分,這些有同源性的部分很可能在雜交過(guò)程中也被捕獲下來(lái)。因此,測(cè)到的序列中,有一部分不是外顯子序列。所以捕獲效率是重點(diǎn),它的定義則是把測(cè)序得到的外顯子部分占全部測(cè)序序列的比列,目前的技術(shù)手段還不能使捕獲效率達(dá)到100% 。
 

目標(biāo)序列捕獲技術(shù)針對(duì)目的基因組區(qū)域進(jìn)行遺傳變異位點(diǎn)檢測(cè),以及對(duì)特定區(qū)域深入研究,得到更深的覆蓋度和更高的數(shù)據(jù)正確性有很大幫助,不僅提高了對(duì)稀有變異的檢測(cè)能力,同時(shí)更經(jīng)濟(jì)有效,通量更高,適合大樣本量的研究。
 

目前其主要方法有傳統(tǒng)PCR、固相雜交法及液相雜交法。
 

PCR反應(yīng)需要合成引物,費(fèi)用很高, 且實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)、人力資源耗費(fèi)大。而新一代測(cè)序需要對(duì)大量外顯子進(jìn)行測(cè)序, 進(jìn)而研究疾病相關(guān)區(qū)域并進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性驗(yàn)證, 傳統(tǒng)的方法不能滿足這一要求。
 

固相雜交法原理則是將探針固定在芯片上,主要是利用雜交和DNA微陣列技術(shù)基因分離原理來(lái)捕獲目標(biāo)區(qū)域。將打斷后的基因組DNA與定制的序列捕獲芯片進(jìn)行雜交, 洗去未雜交上的片段, 隨后將富集的目標(biāo)片段洗脫擴(kuò)增, 賊后進(jìn)行高通量測(cè)序。該方法具有高特異性和高覆蓋度、捕獲區(qū)域可按需設(shè)計(jì)、省時(shí)省力等優(yōu)點(diǎn)。
 

液相雜交法則是在液體里雜交,通過(guò)鏈霉親和素磁珠捕獲標(biāo)記生物素的雜交探針,基于液相序列捕獲的高通量平行靶向測(cè)序技術(shù)具有高度特異性、高正確性、良好的重現(xiàn)性和廣泛的應(yīng)用前景。

 

(責(zé)任編輯:佳學(xué)基因)
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