【佳學(xué)基因檢測(cè)】遺傳性癌癥植入前基因檢測(cè)面臨的實(shí)際挑戰(zhàn)

許多研究人員已經(jīng)對(duì)遺傳性癌癥病例使用PGT技術(shù)相關(guān)的實(shí)際問(wèn)題進(jìn)行了研究。直接和間接方法是分析單基因疾病的兩種廣泛使用的方法。直接方法是先進(jìn)方法，包括對(duì)小的缺失、添加或重復(fù)進(jìn)行片段分析，而小測(cè)序用于點(diǎn)突變。然而，間接方法使用了一組與待檢測(cè)基因相關(guān)的短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）標(biāo)記，但它需要家族中的兩個(gè)受影響個(gè)體來(lái)確定與疾病相關(guān)的單倍型。此外，這些方法的適用性因具體突變而異。

例如，重復(fù)或大缺失突變無(wú)法通過(guò)常規(guī)PCR進(jìn)行鑒定，需要其他技術(shù)，如多重連接依賴性探針擴(kuò)增（MLPA）或Southern印跡分析。盡管如此，這兩種方法都有局限性，例如需要大量的DNA，并且不適合分析單細(xì)胞樣本。當(dāng)通過(guò)片段分析無(wú)法檢測(cè)到致病性變體時(shí)，必須通過(guò)對(duì)極體I與極體II進(jìn)行分析或通過(guò)精子評(píng)估來(lái)鑒定單倍型。然而，使用多重PCR分析STR標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)間接方案需要在基因兩側(cè)至少有兩個(gè)信息豐富的STR才能正確檢測(cè)染色體重組事件，這會(huì)使方案更加復(fù)雜和耗時(shí)。因此，根據(jù)現(xiàn)有突變的性質(zhì)，通常對(duì)每對(duì)使用一種特殊的方案。

賊近的指南，如ESHRE的2020年P(guān)GT-M良好實(shí)踐建議，提供了PGT-M賊佳實(shí)踐的全面概述。這些指南強(qiáng)調(diào)了分析基因側(cè)翼區(qū)域兩側(cè)的重要性，以檢測(cè)重組，并將誤診風(fēng)險(xiǎn)降至賊低，因?yàn)閮H依賴一側(cè)可能導(dǎo)致未檢測(cè)到的重組事件。此外，指南建議使用幾個(gè)PCR重復(fù)來(lái)識(shí)別任何ADO或擴(kuò)增功效問(wèn)題，因?yàn)閮烧叨伎赡芤虮环治龅募?xì)胞而異。例如，在D11S1298標(biāo)記中，ADO在PGT前研究中為20%，但在PGT周期中為0%，而在D11S1313基因型中，在PGT前研究中擴(kuò)增效率約為70%，但在PGT周期中擴(kuò)增效率為90%。

第二種方法是間接方法，當(dāng)受影響的家庭成員不可用時(shí)，必須通過(guò)對(duì)極體I與極體II或精子進(jìn)行分析來(lái)確定單倍型。在這些情況下，由于無(wú)法檢測(cè)特定的變體，可能不知道與所確定的單倍型相關(guān)的確切風(fēng)險(xiǎn)。然而，重要的是要注意，即使在無(wú)法正確確定風(fēng)險(xiǎn)的情況下，間接PGT的使用仍然可以提供有價(jià)值的信息，有助于指導(dǎo)臨床決策。例如，在識(shí)別出高風(fēng)險(xiǎn)單倍型的情況下，這些信息可用于告知患者繼續(xù)妊娠的潛在風(fēng)險(xiǎn)和益處。在某些情況下，盡管存在已知的風(fēng)險(xiǎn)，患者可能會(huì)選擇繼續(xù)妊娠，而在其他情況下，他們可能會(huì)選擇探索其他選擇，如捐贈(zèng)卵子或收養(yǎng)。
 

在確定了低風(fēng)險(xiǎn)單倍型的情況下，這些信息可以為患者提供高效，并有助于緩解人們對(duì)遺傳疾病可能遺傳給后代的擔(dān)憂。

然而，在某些情況下，如Bautista Llacer等人提到的情況，間接方法不適用，因?yàn)榫酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)無(wú)法檢測(cè)致病性變體。間接方法是執(zhí)行該技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)PGT方法，因?yàn)橄嗤亩嘀鼐酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)包括可用于其他父母或家庭的相同微衛(wèi)星標(biāo)記。

然而，當(dāng)在所有情況下都需要至少兩個(gè)信息性STR時(shí)，很難創(chuàng)建多重PCR。此外，STR需要位于基因兩側(cè)的側(cè)翼區(qū)域，以檢測(cè)染色體中的重組事件。

因此，標(biāo)準(zhǔn)間接協(xié)議是特設(shè)協(xié)議。已經(jīng)為每一對(duì)制定了一個(gè)特殊的方案，它取決于現(xiàn)有致病性變體的性質(zhì)?？傮w而言，雖然使用間接PGT方法可能無(wú)法提供與特定遺傳變體相關(guān)的潛在風(fēng)險(xiǎn)的完整情況，它仍然可以提供有價(jià)值的信息，幫助指導(dǎo)決策，并告知患者他們的計(jì)劃生育選擇。臨床醫(yī)生必須仔細(xì)考慮每個(gè)病例的具體情況，并使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)和分析方法，以確保提供的信息正確高效。

Bautista Llacer等人進(jìn)行了熒光多重半巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，以鑒定攜帶致病性變體的單倍型，他們還表明，多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的使用是檢測(cè)樣本污染、等位基因缺失或染色體重組的高效方法。

診斷不應(yīng)僅基于基因側(cè)翼區(qū)域一側(cè)的STR標(biāo)記，因?yàn)榭赡軣o(wú)法檢測(cè)到重組，并可能發(fā)生誤診。

Kakourou等人進(jìn)一步研究并描述了一個(gè)STR標(biāo)記與待研究基因之間的重組

PGT-M可用于已明確確定致病變體的單基因疾病。這些基因座是核基因座（X連鎖、常染色體顯性或隱性遺傳）或線粒體基因座（母系遺傳），涉及致病性種系遺傳變異。

阿齊姆等人指出，在體外受精過(guò)程中進(jìn)行卵巢刺激以獲得更多的卵母細(xì)胞可能會(huì)增加雌二醇的濃度，這在理論上可能會(huì)增加BC反復(fù)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，來(lái)曲唑已被用于抑制體外受精過(guò)程中的雌二醇，并已被證明是有效的。然而，值得注意的是，許多病例報(bào)告表明，接受試管嬰兒治療的患者和未接受試管嬰兒的患者的BC反復(fù)率相似。此外，對(duì)患者和健康對(duì)照進(jìn)行的比較研究表明，在不使用來(lái)曲唑的情況下，試管嬰兒治療并沒(méi)有增加BRCA基因致病性變異引起的BC反復(fù)率。ESHRE指南還建議在某些情況下對(duì)胚胎進(jìn)行癌癥易感性基因檢測(cè)，包括當(dāng)一方或雙方伴侶是癌癥易感性基因攜帶者或有癌癥家族史時(shí)。

總體而言，將ESHRE指南納入PGT-M實(shí)踐可以幫助解決遺傳性癌癥病例在應(yīng)用該技術(shù)時(shí)面臨的許多實(shí)際問(wèn)題。這些指南推薦了可以導(dǎo)致正確診斷、降低誤診風(fēng)險(xiǎn)和提高技術(shù)療效的賊佳實(shí)踐。